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PD-L1檢測助力篩選獲益人群

時間:2019.04.25 11:12:25瀏覽人數:181

安徽快3推介 www.psdtr.icu 免疫檢查點抑制劑、過繼細胞治療、腫瘤疫苗被稱為腫瘤免疫治療三駕馬車,其中免疫檢查點抑制劑這架馬車最為耀眼,自從2015美國前總統卡特從免疫檢查點抑制劑+靶向放療中治愈了晚期黑色素瘤,免疫檢查點抑制劑被推到了治療癌癥的熱點前沿,其代表性藥物就PD-1/PD-L1抑制劑。而影響相關治療的主要因素包括TMB、MSI、MMR以及PD-1/PD-L1標志物的表達量。



PD-L1抑制劑相關藥物目前最熱門也是效果最好當數nivolumab (Opdivo)和pembrolizumab (Keytruda),也就是我們常說的O藥和K藥。臨床研究數據顯示:Pembrolizumab(帕博麗珠單抗)在單獨使用治療非小細胞肺癌(NSCLC)時的毒副反應小,晚期患者對其耐受良好,對高表達PD-L1患者的療效改善明顯。


目前FDA已批準用于治療非小細胞肺癌并根據腫瘤細胞中PD-L1表達TPS≥50%或是 TPS>1%選擇相應的一線治療或或二線治療方案。也是首個被批準用于非小細胞肺癌的免疫治療藥物;opdivo(納武單抗)在日本已適用于黑色素瘤,在美國適用于黑色素瘤和非小細胞肺癌,在歐盟喜獲批黑色素瘤適應證,同時opdivo用于肺癌治療的申請已獲得歐盟CHMP支持。同時這些藥物還適用于PD-L1表達的胃癌、食管癌、直腸癌、霍奇金淋巴瘤等腫瘤的免疫治療。



有人認為腫瘤的免疫療法具有人類腫瘤治療史上的里程碑意義,那么它的檢測就舉足輕重的作用,今天我們先談談PD-L1抑制通路檢測的那些事。PD-1和PD-L1是一對配受體,它們的結合可以讓免疫系統將腫瘤細胞誤認為是“自己人”,通過加入競爭抗體,搶占結合位點,切斷他們的結合,就可以讓免疫細胞恢復對腫瘤細胞的攻擊。


我們知道并非所有的癌癥患者腫瘤組織都表達PD-L1,雖然有報道稱陰性表達的腫瘤組織患者也有受益病例,但一般地,PD-L1蛋白表達量越高,治療效果越好。所以通過檢測從眾多腫瘤患者中篩查出適合PD-L1抑制劑的受益群體(約30%)是實現“精準”腫瘤免疫治療的關鍵。




規范PD-L1檢測需要解決的問題:

一、目前市場抗體眾多,不同抗體之間對表達量計算的算法不同,比較難取得高一致性,沒有達成統一標準規范。我們大概收集了市場主要的幾個克隆號抗體它們包括22C3、28-8、、SP142和E1L3N,下面我來看一下北歐質控中心NodiQC的報告:


圖中我們可以看出E1L3N雖然比22C3數據稍微好點,但數據量太少,所以我們可以判斷22C3克隆號的抗體最優,目前FDA只批準了丹科的 22C3作為Pembrolizumab伴隨診斷抗體, 丹科的 28-8和羅氏 SP142則分別為Nivolumab和Atezolizumab的補充診斷。


二、評價免疫組化室結果依靠醫師主觀判斷,存在主觀誤差,標志物水平的量化難免產生一定的影響,如果能將主觀的指標轉化為客觀的數字指標替代,對判讀標準的規范統一會有較積極的作用。


三、從上面信息大家應該可以了解到,抗體產品雖然很多,但目前有證的也只有丹科的,加上國家對這類抗體銷售使用的政策收緊,導致供應商品和檢測平臺形成壟斷供應,產品價格漫天要價,出現檢測成本高出收費標準的現象,不利于實驗室開展檢測服務。一些醫院為了使患者得到有效治療,甚至開展違法檢測現象,檢測質量更難保證。


即便如此,用于指導治療性檢測結果對病人的疾病走向意義非常關鍵,因此PD-L1 IHC檢測規范更顯得迫在眉睫了。

PD-L1 IHC檢測規范

PD-L1表達不同于預測的致癌性改變。致癌性驅動因子改變的生物標志物檢測通常提供非黑即白的答案(陽性或陰性),腫瘤進展和治療過程中一般不會改變。但是PD-L1 IHC檢測的是連續變量過程,因為表達水平可從1%到100%不等,且在陽性和陰性結果之間沒有明顯的區分。


因此PD-L1檢測是病理所有免疫組化項目當中最繁雜的檢測,因為檢測抗體種類繁多,且部分抗體國內仍未上市,檢測平臺多樣,不同檢測平臺檢測結果可能不一致,技術人員水平良莠不齊,規范PD-L1的IHC檢測就顯得非常重要。


以下筆者以探討的角度對PD-L1 IHC檢測規范做建議:

標本前處理

1、制定流程文件,按sop文件嚴格執行病人和標本信息的核對驗收工作,從檢驗前杜絕信息錯誤,張冠李戴等情況發送。只有正確的信息才能真實反映病人的患者狀態。

2、加強臨床溝通,保證標本冷缺血20分鐘內加入足量10%中性緩沖福爾馬林固定,并及時送檢。

3、病理技術人員接到標本后應根據指導規范對標本進行每隔一厘米的切開固定并用紗布隔開切面固定,避免由于固定不充分導致抗原抗體丟失的現象。

4、避免標本過度固定,切開固定后24到48小時內完成取材并上機脫水,過度固定會導致蛋白和固定液交聯過度,導致抗原修復困難,降低PD-L1的表達量,甚至是假陰性結果出現。


檢驗中控制

免疫組化檢測的質量控制貫穿于病理科免疫組化實驗的全過程,需要實驗室有良好的管理制度和作業指導書 ,不斷優化和完善各個流程,保證從取材、脫水、包埋、切片、烤片以及免疫組化染色操作都達到最佳效果。


建立科學有效性免疫組化的質量控制體系,質控分為室內質控和室間質控。室內質控監控精密度的,它包括完善的科學的流程文件和作業指導書、切片管理、試劑管理、儀器管理已經操作人員質素管理等,通過這些元素的管理來盡可能的保證實驗元素穩定,進而提高檢測結果的精密度。

具體措施:

1、做好PDL1試劑的質控,選擇合適的一抗及相應檢測系統。有條件盡量使用有證(CFDA/FDA )的商品化試劑,如丹科的22C3抗體。

2、通過預實驗對比找到該抗體的最佳修復條件、孵育條件、抗體濃度以及顯色條件等

3、試劑管理要科學合理,保證試劑的有效性和冷鏈的持續狀態。

4、試劑更換品牌或批號時要做好新批號或更換新的克隆號必須進行有效性驗證。

5、參與試劑配制的人員必須進行規范化培訓,且有SOP 文件作指導,減少人為因素干擾

6、使用者必須注意試劑的物理性狀改變(顏色、透明度等)

7、 PD-L1結果是用于指導治療的,每一位患者的每一次檢測均應設立陰性對照

8、PD-L1的每一例檢測必須設立陽性對照,常用的陽性對照為人的扁桃體和胎盤。

9、技術員每天出片前必須通過觀察每一張片子來實時監視動態變化,篩查質量問題,對沒有質量問題的片才能移交診斷醫師診斷。

10、建立健全人才培養計劃,實驗操作人員素質是關鍵因素。


室間質控監控的則是檢測結果的準確度。國內外有許多的室間質評機構,包括北歐的Nordi QC、美國的CAP、英國的UKNEQAS,而國內有PQCC、CCP、CCPI以及各省的病理質控中心。每個實驗室可以根據各自的實際情況定期參加不同的室間質控,校準自己的檢測方法和結果。

檢測后控制:

1、每月底進行所有切片回顧,了解染色質量及醫師判讀結果,并通過小結記錄大致情況,發現問題及時通過通過PDCA,不斷改進流程、提高質量。

2、蠟塊切完后要及時封蠟,以便更持久保存蠟塊組織內的抗原抗體信息。

3、及時按要求核對玻片、蠟塊、申請單等病案信息進行歸檔。

4、做好結果解釋接待工作,為臨床和病人答疑解惑,避免不必要的誤解。


最后,診斷醫師的判讀誤差也需要控制,需要我們定期組織診斷醫生進行統一標準的判讀培訓和考核。只有技術人員做出正確的結果,病理醫生做出正確的診斷,臨床醫生才能給予患者正確的治療。



參考文獻:


1、閆風彩 金木蘭 石峰 昌紅 周全《PD-1/PD-L1在惡性腫瘤中的表達及研究進展》.

2、王心然 賈迎 劉月平 《PD-1/PD-L1檢測點抑制劑抵抗機制的研究進展》.

3、倪燦榮 《PD-L1免疫組化檢測與質量控制》.